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一、前言
佐劑是疫苗的一種添加劑，當(dāng)它先于抗原或與抗原混合注入機(jī)體后，能夠增強(qiáng)機(jī)體對(duì)抗原的免疫應(yīng)答或者改變免疫反應(yīng)的類型，屬于非特異性的免疫增強(qiáng)劑。隨著現(xiàn)代生物技術(shù)和基因工程技術(shù)的迅速發(fā)展，針對(duì)不同疾病已開展了各種*基因工程疫苗的研制，佐劑尤其是*免疫佐劑的研究就顯得尤為迫切。
在標(biāo)準(zhǔn) T/CVDA02《復(fù)合礦物油動(dòng)物疫苗佐劑》中，對(duì)于佐劑的質(zhì)量檢測(cè)中有明確規(guī)定測(cè)定碘值含量，本方法參考其中的檢測(cè)方法制定了運(yùn)用電位滴定檢測(cè)的方法。該方法檢測(cè)方便，減少了人為判斷指示劑顏色對(duì)結(jié)果的誤差影響，增加了檢測(cè)度，并且提高了檢測(cè)效率，是檢測(cè)佐劑碘值的。
二、儀器與試劑
2.1、儀器
JH-T6全自動(dòng)電位滴定儀，鉑復(fù)合電極，分析天平等。
2.2、試劑
三氯甲烷，韋氏試劑，碘化鉀，硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定液（0.1mol/L）。
三、實(shí)驗(yàn)方法
3.1、樣品檢測(cè)
準(zhǔn)確稱取 1.0g 樣品，置于滴定杯中，加入三氯甲烷 30mL 溶解，攪拌均勻，向滴定杯中準(zhǔn)確加入 10mL韋氏試劑，封口膜密封，暗處放置 1 小時(shí)，然后加入 15mL 碘化鉀和 10mL 水，在合適的攪拌速度下，插入電極和滴定頭，設(shè)置好參數(shù)，用硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)滴定液（0.1mol/L），以鉑復(fù)合電極為工作電極，在JH-T6上進(jìn)行滴定至終點(diǎn)。同時(shí)做空白實(shí)驗(yàn)。
設(shè)定滴定儀參數(shù)如表 1 所示：
表 1 滴定參數(shù)設(shè)置
|
滴定模式： |
動(dòng)態(tài)滴定 |
*小添加體積 |
0.02mL |
|
電極平衡時(shí)間： |
4s |
預(yù)添加體積： |
25mL |
|
電極平衡電位： |
1mv |
滴定速度： |
標(biāo)準(zhǔn) |
|
結(jié)束體積： |
50mL |
相關(guān)系數(shù)： |
-12.69 |
|
電位突躍量： |
200 |
補(bǔ)液速度： |
5 |
3.2、測(cè)試
圖譜示例
四、結(jié)果與討論
4.1、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表 2 所示：
表 2 測(cè)試結(jié)果
|
樣品批號(hào) |
樣品序號(hào) |
樣品質(zhì)量/g |
滴定液濃度 （硫代硫酸鈉）/(mol/L) |
滴定體積/mL |
碘值 （g/100g） |
平均值 |
|
20211201 |
空白 |
/ |
0.1009 |
29.850 |
/ |
/ |
|
1 |
1.00511 |
25.623 |
5.3848 |
5.376 |
||
|
2 |
1.00073 |
25.555 |
5.4954 |
|||
|
3 |
1.00228 |
25.743 |
5.2467 |
|||
|
20220101 |
1 |
1.01762 |
25.968 |
4.8847 |
4.768 |
|
|
2 |
1.00668 |
26.334 |
4.4721 |
|||
|
3 |
1.01217 |
25.939 |
4.9475 |
4.2、結(jié)論
本次測(cè)試的的動(dòng)物疫苗佐劑均滿足測(cè)試結(jié)果在 4.0-9.0 范圍內(nèi)，能夠滿足動(dòng)物疫苗佐劑的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，并且操作簡(jiǎn)單，檢測(cè)效率高，能夠滿足實(shí)驗(yàn)室日常檢測(cè)需求。
參考文獻(xiàn)
[1] T/CVDA02 復(fù)合礦物油動(dòng)物疫苗佐劑[ S ].
[2] GB/T13892 表面活性劑 碘值的測(cè)定[ S ].
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